BMA的主要專(zhuān)長(zhǎng)在于抗體在免疫組織化學(xué)和酶免疫測(cè)定（ELISAs）中的應(yīng)用。生產(chǎn)*適用于沒(méi)有胎牛血清的培養(yǎng)基。這不僅是對(duì)可持續(xù)性和動(dòng)物福利的重要貢獻(xiàn)，而且產(chǎn)品不含有污染的?？贵w。它們通常僅供體外研究使用，但支持向診斷領(lǐng)域的公司許可適當(dāng)?shù)漠a(chǎn)品。

BMA S-1007說(shuō)明書(shū)

S-1007

描述

S100A8 ELISA（鈣粒蛋白A，MRP8）

應(yīng)用

EIA和ELISA

價(jià)錢(qián)

瑞士法郎940.00 / 2×96測(cè)試
 

數(shù)量

2 x 96次測(cè)試

MRP8（S100A8）
酶免疫分析
用于生物液體中mrp8的特異性測(cè)定
測(cè)試說(shuō)明
產(chǎn)品代碼：S-1007
批號(hào)：23E1203
僅供體外和研究使用。
不適用于診斷應(yīng)用。

試劑盒包含：2個(gè)預(yù)涂、干燥的微量滴定板和執(zhí)行2x96測(cè)試的試劑。
到達(dá)后冷藏，不要冷凍。

簡(jiǎn)介和基本信息
替代名稱(chēng)：
MRP8:S100A8，鈣粒蛋白A，CP-10（小鼠體內(nèi)）
MRP14:S100A9，鈣粒蛋白B
MRP8/14:鈣保護(hù)素，L1，（P8,14），p34
遷移抑制因子相關(guān)蛋白（mrp）-8和-14屬于鈣的s-100家族
與骨髓細(xì)胞分化相關(guān)的結(jié)合蛋白。它們?cè)陟o止期中性粒細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞（尤其是銀屑?。?、浸潤(rùn)性組織巨噬細(xì)胞和活動(dòng)性炎癥疾病的上皮細(xì)胞中高度表達(dá)。慢性或急性炎癥中巨噬細(xì)胞亞群的異質(zhì)性反映在mrp8和mrp14的不同表達(dá)上。表達(dá)mrp8和mrp14的吞噬細(xì)胞屬于早期浸潤(rùn)細(xì)胞，而mrp8單獨(dú)存在于慢性炎癥組織中。mrp8、mrp14和ca2+依賴(lài)的mrp8/14雜合物的部分拮抗作用使它們成為多種介質(zhì)。
功能
MRP8/14雜合物的一個(gè)主要功能是其抗菌活性（因此被稱(chēng)為鈣保護(hù)素）。mrp8/14通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)鋅抑制病原菌的生長(zhǎng)。mrp8/14也可誘導(dǎo)某些腫瘤細(xì)胞凋亡。這些活性被zn2+和其他二價(jià)陽(yáng)離子所消除，而不是被ca2+或mg2所消除。+
mrp8/14雜合物的另一個(gè)重要特性是其作為脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的*作用。ca2+依賴(lài)性脂肪酸-mrp8/14復(fù)合物是中性粒細(xì)胞中多不飽和脂肪酸的主要載體。復(fù)合物在靜息細(xì)胞中表達(dá)，刺激后移向膜。Zn2+抑制生理性Zn2+血清濃度下MRP8／14的脂肪酸載體容量，從而在血液循環(huán)中不攜帶脂肪酸。
這使得mrp8/14成為鈣信號(hào)傳導(dǎo)和花生四烯酸效應(yīng)之間的重要介質(zhì)。
mrp8（和mrp8/14，但不是單獨(dú)的mrp14）在炎癥介質(zhì)刺激下分泌。對(duì)中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞是一種有效的化學(xué)引誘劑。然而，mrp8不會(huì)增加細(xì)胞內(nèi)ca2+，也不會(huì)引起氧化爆發(fā)和顆粒酶釋放，如c。
將MRP8暴露于次氯酸鹽（可能由活化的中性粒細(xì)胞產(chǎn)生）中，可將其轉(zhuǎn)化為不活潑的二硫鍵二聚體。糖皮質(zhì)激素通過(guò)炎癥介質(zhì)上調(diào)mrp8的誘導(dǎo)。MRP8可能有助于調(diào)節(jié)母胎之間的相互作用
解釋為什么滅活小鼠的mrp8基因是胚胎致死的。
mrp14和mrp8在活化巨噬細(xì)胞中的共同表達(dá)缺乏，說(shuō)明它們的作用不同。mrp14的c端序列與中性粒細(xì)胞固定因子的n端序列相同。mrp14可以磷酸化，從而提高其鈣結(jié)合能力。然后它傾向于
從細(xì)胞溶膠轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜和細(xì)胞骨架。mrp14被證明與具有轉(zhuǎn)移增強(qiáng)能力的中性粒細(xì)胞亞群有關(guān)。
生物化學(xué)
人mrp8分子量為11.0kd，人mrp14分子量為13.3kd，截短12.9kd。ca2+誘導(dǎo)形成（mrp8）（mrp14）（簡(jiǎn)稱(chēng)mrp8/14），（mrp8）2（mrp14）和（mrp8/14）2的雜合物。上面各有兩個(gè)EF手圖案
MRP8和MRP14。mrp14對(duì)鈣的親和力高于mrp8，而cterminal-ef2的親和力高于n末端ef1。c端結(jié)構(gòu)域也主要決定了二聚反應(yīng)的特異性。ef2中的螺旋結(jié)構(gòu)在鈣結(jié)合時(shí)發(fā)生了很大的構(gòu)象變化，可能是鈣誘導(dǎo)構(gòu)象的一個(gè)觸發(fā)因素。
改變。

mrp8/14的抗菌活性是由鋅螯合作用引起的。
mrp14的c端被zn2+逆轉(zhuǎn)。兩個(gè)亞單位都沒(méi)有顯示出抗菌作用
活性本身，表明鈣誘導(dǎo)的二聚反應(yīng)導(dǎo)致多組氨酸序列的暴露改變。
ca2+誘導(dǎo)花生四烯酸和多不飽和脂肪酸與mrp8/14的結(jié)合是通過(guò)影響鈣依賴(lài)性脂肪酸結(jié)合囊的構(gòu)象而被zn2+或cu2+阻止的。大脂肪酸結(jié)合發(fā)生在等摩爾濃度的mrp8和mrp14和
每個(gè)EF手的值大于3個(gè)鈣離子。
病理學(xué)意義
mrp8/14和mrp14通常與急性炎癥相關(guān)，mrp8與慢性炎癥相關(guān)。與其他疾病標(biāo)記物相比，mrps的診斷價(jià)值和優(yōu)勢(shì)在于它們?cè)谙鄳?yīng)細(xì)胞群激活后立即被制備和釋放。其他
標(biāo)記物可能在下游事件中產(chǎn)生，或者需要在肝臟中從頭合成。
不同條件下，mrp8/14雜合物水平與疾病活動(dòng)有顯著相關(guān)性。然而，mrp8亞單位水平的變化很少受到關(guān)注。
-糞便mrp8/14水平預(yù)測(cè)炎癥性腸病的復(fù)發(fā)，并區(qū)分健康對(duì)照組、無(wú)或低疾病活動(dòng)性患者和活動(dòng)性疾病患者。
-血漿mrp8/14水平可能是腎移植急性排斥反應(yīng)的標(biāo)志物。
-血清mrp8/14濃度是酒精性肝硬化復(fù)發(fā)感染和低生存率的預(yù)后指標(biāo)。
-血清，尤其是滑液中mrp8/14的濃度與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的疾病活動(dòng)密切相關(guān)。sle患者血清mrp8/14水平高于健康對(duì)照組，與疾病活動(dòng)、抗dna抗體的存在以及關(guān)節(jié)炎的發(fā)生有關(guān)。
-mrp8和mrp14可在年齡相關(guān)性腦改變和神經(jīng)退行性疾病中檢測(cè)到。在腦瘧疾中，小膠質(zhì)細(xì)胞的活化和mrp8/14的檢測(cè)在整個(gè)大腦中廣泛存在。
-mrp8（原稱(chēng)囊性纖維化（cf）抗原）是cf炎癥的一個(gè)指標(biāo)，在cf患者的肺和血清中有組成性表達(dá)，在沒(méi)有急性不適或發(fā)熱的患者血漿中有升高。lps在cf中誘導(dǎo)mrp8的作用比正常人明顯。
-mrp8/14存在于尿路結(jié)石和牙石中。齦溝液中mrp8/14水平與其他牙周病標(biāo)志物有較好的相關(guān)性，有助于評(píng)價(jià)牙周炎癥的程度。

試驗(yàn)原理
一步非競(jìng)爭(zhēng)夾心法，過(guò)氧化物酶催化試劑限制
四甲基聯(lián)苯胺顯色反應(yīng)，包括停止反應(yīng)和在450/630nm處在多點(diǎn)讀板器中讀取。
提供的試劑
S-1007A：準(zhǔn)備使用預(yù)涂和穩(wěn)定的微量滴定板+板封閉劑（每個(gè)2個(gè)）。
s-1007b 500ng標(biāo)準(zhǔn)品，重組mrp8的穩(wěn)定凍干制劑。
S-1007D分析緩沖液，3倍濃縮。紅色溶液。
S-1007E四甲基苯甲酰-H2O2溶液。保持在黑暗中。
S-1007F TMB底物緩沖液（檸檬酸鉀）
S-1007R試劑混合物：2.1毫升含有HRPO偶聯(lián)檢測(cè)抗體的混合物，
11倍濃縮
該試劑盒至少在冷藏保存的日期前是穩(wěn)定的。
未提供的材料：停止溶液（1N硫酸，見(jiàn)下文）、稀釋用塑料管、清洗用等滲鹽水、移液管、重復(fù)移液管、8通道移液管（2）、微孔板清洗機(jī)和讀取器（450nm/630nm過(guò)濾器）。
開(kāi)始分析前的準(zhǔn)備工作讓所有試劑在開(kāi)始前預(yù)熱到室溫。強(qiáng)烈建議對(duì)樣品和標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行重復(fù)測(cè)試。準(zhǔn)備除TMB以外的所有下列稀釋液
開(kāi)始分析前的底物溶液

測(cè)定緩沖液
用2份蒸餾水稀釋1份封閉濃縮液（S-1007D）以獲得分析緩沖液。例：量取濃縮液15ml，加水30ml。
標(biāo)準(zhǔn)：
用1.0ml試液重建凍干標(biāo)準(zhǔn)品。*渦流幾次，持續(xù)10秒，中間孵育幾分鐘。此500ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品現(xiàn)在可以進(jìn)一步稀釋。如有必要，將本標(biāo)準(zhǔn)中未使用的部分儲(chǔ)存在-20℃以備進(jìn)一步使用。
稀釋液：-在五個(gè)1.5ml聚丙烯管上貼上“25”、“5”、“1”、“0.2”和“0.04”的標(biāo)簽。
-在“25”管中加入950微升分析緩沖液，在其他四個(gè)管中加入400微升分析緩沖液
-向“25”管中加入50微升500ng/ml儲(chǔ)備溶液，進(jìn)行連續(xù)稀釋。充分混合，將100微升該溶液轉(zhuǎn)移到“5”管中，并通過(guò)始終按降序?qū)?00微升轉(zhuǎn)移到下一個(gè)管中繼續(xù)進(jìn)行連續(xù)稀釋。這提供了五個(gè)標(biāo)準(zhǔn)解決方案，用于生成具有重復(fù)標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
試劑混合物（工作稀釋?zhuān)?br />用10份分析緩沖液稀釋1份封閉的試劑混合物（S-1007R）。示例：如果處理四個(gè)含有32個(gè)孔的試紙條（每個(gè)孔將得到100微升），則將0.32ml試劑混合物添加到3.2ml分析緩沖液中。根據(jù)你的需要調(diào)整這個(gè)音量。
樣品：
在-20°C或更低溫度下將樣品分批儲(chǔ)存。盡量避免樣品的凍融循環(huán)，并在適當(dāng)稀釋的分析緩沖液中稀釋樣品。血清或血漿應(yīng)按1:5稀釋。
示例：在臺(tái)式離心機(jī)中旋轉(zhuǎn)樣品5分鐘，然后將100微升添加到400微升分析中
Buffer?；河?:20-1:1000；呼氣、唾液、bal和尿液用1:2。
等滲鹽水：
在1升去離子水或類(lèi)似質(zhì)量的水中溶解9g NaCl。
TMB基質(zhì)溶液：使用前立即制備。對(duì)于整個(gè)板，將20毫升基質(zhì)緩沖液（S-1007F）與1毫升基質(zhì)原液（S-1007E）混合。準(zhǔn)備后15分鐘內(nèi)使用。

停止解決方案
將硫酸稀釋至1N的濃度。示例：向100ml中添加2.9ml 95-97%的硫酸
水（按此順序）。95-97%濃硫酸（比重1.84）為36N。
溶液宜在開(kāi)始分析前制備。
試驗(yàn)程序
1。向每個(gè)孔中加入100μl稀釋試劑混合物（見(jiàn)上文）。重復(fù)吸管配藥
如果使用多個(gè)色譜柱，100微升方便。
2a.向1號(hào)柱下井加入100μl的25ng/ml（“25”）至0.04ng/ml（“0.04”）標(biāo)準(zhǔn)溶液。
和2，如下所示。包括兩個(gè)空白（如果使用重復(fù)的樣本），得到
100μl分析緩沖液。
2b.將100μL適當(dāng)稀釋的樣品加入相應(yīng)的孔中。
三。室溫下在潮濕環(huán)境中培養(yǎng)90分鐘。
4。用等滲鹽水清洗盤(pán)子3次。用柔軟的吸水紙吸干。
此時(shí)稀釋TMB基質(zhì)溶液，準(zhǔn)備好停止溶液和8通道移液管
及時(shí)停止顏色反應(yīng)。
5。向每個(gè)孔中加入200μL稀釋的TMB基質(zhì)溶液。在室內(nèi)孵育3分鐘
溫度。當(dāng)MRP8存在時(shí)，發(fā)生藍(lán)色反應(yīng)。
6。通過(guò)向每口井中加入100μl停止溶液來(lái)停止顏色反應(yīng)。顏色由藍(lán)色變?yōu)?br />黃色的。注意：停止溶液含有1N硫酸，具有腐蝕性，會(huì)導(dǎo)致灼傷。
如果與眼睛接觸，立即用大量水沖洗并就醫(yī)。
7。在大約15分鐘內(nèi)，讀取450nm處的吸光度，如有可能，參考設(shè)置為630nm。
建議的板設(shè)置：
可選擇下列板布置，其中100至0.39為標(biāo)準(zhǔn)稀釋液從100ng/ml到0.39ng/ml，如上所述。SA-1至SA-40為重復(fù)樣品。
CONT是指具有已知MRP8含量的對(duì)照血清（不包括在試劑盒中）。

計(jì)算
方法由復(fù)制品形成，樣品中的含量由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)通過(guò)微型板計(jì)算軟件（如Softmax、分子裝置）或手動(dòng)計(jì)算得出。超出標(biāo)準(zhǔn)范圍的樣品稀釋?xiě)?yīng)使用適當(dāng)?shù)南♂屢褐貜?fù)。

局限性和不相容性
不應(yīng)混合來(lái)自不同批次或不同分析的成分。
血清和血漿樣本可以給出可比的結(jié)果。然而，血液樣本需要在提取后立即冷卻，并立即分別處理成血漿或血清。
室溫和孵育時(shí)間或多或少影響所有反應(yīng)。如果某些值偏離刻度（E450nm>3.0），我們建議從每個(gè)孔中取出相同體積的溶液（例如100μL），并重新測(cè)量板。

結(jié)果的解釋
mrp8/14的循環(huán)水平是一個(gè)很好的病理指標(biāo)。此外，循環(huán)亞單位mrp8和mrp14的水平也可以測(cè)量，并可能為疾病的發(fā)病機(jī)制提供有趣的線(xiàn)索。mrp亞家族正常范圍的測(cè)定
血清或血漿中：

MRP8／14復(fù)合物的濃度是炎癥的嚴(yán)重程度的指示（值＞100000 ng/ml）已在血清和血漿中測(cè)定。c-反應(yīng)蛋白（crp）和其他炎癥標(biāo)志物并不總是與mrp8/14相關(guān)，因?yàn)閙rp的水平比crp等急性期蛋白的水平升高更早。
mrp8/14低于正常水平（<100ng/ml）可能提示粒細(xì)胞分化障礙。
MRP8濃度升高表示慢性炎癥。研究表明，93%的類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者mrp8值升高。然而，mrp8水平在急性炎癥如活化性關(guān)節(jié)炎和細(xì)菌感染的正常范圍內(nèi)。
急性炎癥，如細(xì)菌感染的特征是：
正常MRP8濃度
正常至升高的MRP14濃度
高濃度MRP8／14復(fù)合物（＞3000～100000 ng/ml血清）
慢性炎癥，如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的特征是：
高濃度MRP8
高mrp14濃度
略微升高的MRP8/14雜合物濃度。mrp8/14濃度在慢性炎癥的急性期明顯升高。
病毒感染不會(huì)導(dǎo)致mrp8/14濃度升高。胰腺炎患者的茜拉沒(méi)有顯示MRP8／14血清濃度升高。
糖皮質(zhì)激素免疫抑制治療使mrp8/14雜合物水平恢復(fù)到正常范圍