RNAscope® 原位雜交

RNAscope®技術(shù)是近年來zui火的RNA原位雜交技術(shù)，是RNA原位雜交（ISH）領(lǐng)域的一項重大進步。由Advanced Cell Diagnostics公司（Newark, CA）開發(fā)，通過的雙“Z”探針設(shè)計和信號放大系統(tǒng)，使RNA原位雜交具有高度特異性、單分子檢測的敏感性并有*的信噪比，能夠在單細胞水平同時定量多個RNA的表達，在獲得單細胞中單拷貝RNA表達數(shù)據(jù)的同時提供完整的組織形態(tài)學(xué)信息。

RNAscope 方法克服了以前的RNA原位雜交技術(shù)的非特異性雜交、靈敏度低、對樣本要求高等弱點，可替代傳統(tǒng)的ISH/FISH RNA 原位檢測，同時單分子檢測靈敏度提供了在組織細胞原位對單個細胞中基因的表達進行檢測，釋放RNA作為生物標記的全部潛能，提高對疾病與標志物之間復(fù)雜的生物學(xué)相關(guān)性的認識，是理想的能夠用于NGS和芯片技術(shù)后期轉(zhuǎn)化研究技術(shù)平臺。

RNAscope® 原位雜交步驟：

RNAscope®原位雜交是一項新穎的用于檢測位于組織細胞原位的目標RNA的原位雜交（In Situ Hybridization，ISH)檢測技術(shù)。該技術(shù)進行RNA原位雜交檢測主要分成5步。

Step 1：透化：通過RNAscope®預(yù)處理試劑盒處理載玻片上固定好的組織或細胞，暴露目標RNA。

Step 2：探針雜交：針對靶基因設(shè)計RNAscope®Z型探針與目標RNA雜交。

Step 3：信號放大：RNAscope®檢測試劑盒逐級信號放大。

Step 4：信號可視化：在普通光學(xué)顯微鏡或者多光譜熒光成像系統(tǒng)下，每一個目標RNA分子以一個點狀信號的形式呈現(xiàn)。

Step 5：量化分析：顯微鏡下直接計數(shù)或者使用圖像分析軟件如RNAscope® SpotStudio™ 或HALO對每一個細胞中的RNA單分子信號進行定量分析。

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