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當(dāng)前位置:首頁(yè)技術(shù)文章SGI-DNA CE1000-50K 說(shuō)明書(shū)

SGI-DNA CE1000-50K 說(shuō)明書(shū)

更新時(shí)間:2017-11-14點(diǎn)擊次數(shù):2154

世界*實(shí)驗(yàn)材料供應(yīng)商 SGI-DNA正式授權(quán)上海起發(fā)為其中國(guó)代理, SGI-DNA在一直是行業(yè)的*,一直為廣大科研客戶提供zui為的產(chǎn)品和服務(wù),上海起發(fā)一直秉承為中國(guó)科研客戶帶來(lái)的產(chǎn)品,的服務(wù),簽約 SGI-DNA就是為了給廣大科研客戶帶來(lái)更加完善的產(chǎn)品和服務(wù),您的滿意將是我們zui大的收獲

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SGI-DNA是Synthetic Genomics,Inc(SGI)的全資子公司,成立于2013年,總部位于加利福尼亞州La Jolla。

SGI-DNA基于克雷格·文特爾(J.Craig Venter),漢密爾·史密斯(Ham Smith),克萊德·哈奇森(Clyde Hutchison),丹·吉布森(Dan Gibson)及其團(tuán)隊(duì) 等科學(xué)家的科學(xué)進(jìn)步和突破,利用*的專有DNA技術(shù)生產(chǎn)復(fù)雜的合成基因和試劑。SGI-DNA還提供全面的基因組服務(wù),包括全基因組測(cè)序,文庫(kù)設(shè)計(jì)和其他生物信息服務(wù)。

SGI-DNA負(fù)責(zé)SGI合成DNA業(yè)務(wù)的所有商業(yè)方面,并專注于與學(xué)術(shù)和商業(yè)研究人員的戰(zhàn)略業(yè)務(wù)關(guān)系。

XactEdit™ Cas9 Nuclease with NLS

含有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶

使用這種高度純化的酶,進(jìn)行有針對(duì)性的指導(dǎo)RNA指導(dǎo)的雙鏈DNA切割。帶有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶是一種含有核定位信號(hào)(NLS)的純化的重組化膿性鏈球菌(Streptococcus pyogenes) Cas9蛋白。當(dāng)與適當(dāng)設(shè)計(jì)的引導(dǎo)RNA(gRNA)復(fù)合時(shí),XactEdit™Cas9核酸酶介導(dǎo)位點(diǎn)特異性的靶向雙鏈DNA切割。將Cas9:gRNA復(fù)合物(RNP)引入細(xì)胞產(chǎn)生雙鏈DNA斷裂(DSB),其已經(jīng)用于多種靶向基因組編輯研究,例如同源敲入和基因敲除。

XactEdit™Cas9核酸酶可作為試劑盒或作為獨(dú)立的酶使用,濃度為1 mg / mL或10 mg / mL,可配制的導(dǎo)向RNA(gRNA)靶向DNA消化。純化至> 90%均一性,XactEdit™Cas9不顯示非特異性核酸酶活性。這些性能,以及低內(nèi)毒素水平,使XactEdit™Cas9成為各種應(yīng)用的理想選擇。XactEdit™酶可用于體外切割分析,或通過(guò)電穿孔或轉(zhuǎn)染引入細(xì)胞以靶向基因組序列。與載體或基于mRNA的Cas9系統(tǒng)不同,XactEdit™Cas9 RNP復(fù)合物不需要轉(zhuǎn)錄或翻譯,可以在進(jìn)入細(xì)胞后立即行動(dòng)。

概要

  •  高度純化 - 通過(guò)反相HPLC和SDS-PAGE純度大于90%
  • 高活性的質(zhì)量控制 - 通過(guò)體外活性測(cè)定進(jìn)行批量測(cè)試
  •  沒(méi)有非特異性DNA酶或RNA酶活性
  •  低內(nèi)毒素水平 - 通過(guò)LAL測(cè)定小于0.01 EU /μg
  •  含有核定位信號(hào)(NLS)以有效地靶向細(xì)胞核
  •  可用于1 mg / mL和10 mg / mL濃度

 

具有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶顯示出高水平的體外活性

體外活性使用不同量的XactEdit™Cas9核酸酶(NLS)和gRNA

圖2. 使用不同量的XactEdit™Cas9核酸酶(NLS)和gRNA的體外活性。為了確定使用的XactEdit?Cas9核酸酶和gRNA的zui有效量,進(jìn)行體外活性測(cè)定。在每條泳道中,將100ng對(duì)應(yīng)于同源框轉(zhuǎn)錄因子Emx1的770bp DNA片段與量的XactEdit TM Cas9蛋白和gRNA一起溫育。XactEdit™Cas9:gRNA復(fù)合物的特異性切割產(chǎn)生兩個(gè)片段(283 bp和487 bp)。數(shù)據(jù)表明,XactEdit?Cas9蛋白使用不同量的輸入酶和gRNA有效地和特異性地切割靶位點(diǎn)處的底物。泳道1中顯示的分子量(MW)標(biāo)記是1kb梯。

具有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶顯示出高度一致的體內(nèi)核酸酶活性

與其他市售Ca9(NLS)核酸酶相比,含有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶的體內(nèi)活性

圖3. 具有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶與其他市售Cas9(NLS)核酸酶相比的體內(nèi)活性。體內(nèi)將兩種不同批次的XactEdit TM Cas9核酸酶的核酸酶活性與來(lái)自供應(yīng)商T和N的Cas9核酸酶的核酸酶活性進(jìn)行比較。對(duì)于每個(gè)測(cè)定,使用1μgCas9和200ng體外轉(zhuǎn)錄的指導(dǎo)RNA形成Cas9:gRNA復(fù)合物, Emx1基因。通過(guò)電穿孔將復(fù)合物引入HEK 293T細(xì)胞。通過(guò)突變檢測(cè)分析(圖A,左)和MiSeq TM分析(圖B,右)檢查Cas9雙鏈斷裂(DSB)頻率。在圖A中,由DSB產(chǎn)生的序列在瓊脂糖凝膠電泳中顯示為裂解產(chǎn)物,表明Cas9誘導(dǎo)的DSB位點(diǎn)。泳道1和8是分子量(MW)標(biāo)記(來(lái)自New England Biolabs的Quick-Load 2-Log DNA ladder)。在圖B中,靶位點(diǎn)的MiSeq TM測(cè)序的定量分析顯示為轉(zhuǎn)染細(xì)胞裂解的百分比。

高度純化,以確??煽?,一致,具體的核酸酶活性

與其他市售Ca9(NLS)核酸酶相比,含有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶的體內(nèi)活性

圖4. XactEdit™Cas9的反相HPLC分析。使用反相HPLC分析10μgXactEdit TM Cas9。Zorbax 300SB-C3柱,流動(dòng)相A =在水中的0.1%TFA,流動(dòng)相B =在乙腈中的0.1%TFA,在1.0mL / min,40℃,214nm檢測(cè)下梯度= 5-100%B 30分鐘。

XactEdit™Cas9的反相HPLC分析

圖5.還原XactEdit™Cas9的SDS-PAGE。使用還原性SDS-PAGE分析XactEdit Cas9。4-15%Bio-Rad TGX凝膠,Bio-Rad Precision Plus蛋白標(biāo)記,SYPRO-Orange染色。

對(duì)XactEdit™Cas9進(jìn)行批量活動(dòng)比較

圖6. XactEdit™Cas9的批次到批次活動(dòng)比較 使用針對(duì)5.5kb目標(biāo)設(shè)計(jì)的三種不同指導(dǎo)RNA(gRNA-1,gRNA-2和gRNA-2)比較兩種不同批次的XactEdit™Cas9的活性的體外活性測(cè)定。gRNA-SC是不識(shí)別目標(biāo)DNA的混雜的陰性對(duì)照RNA。XactEdit™Cas9酶的存在或不存在分別由+和 - 表示。通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳分析樣品以分離模板DNA(5.5kb,未切割)和消化產(chǎn)物(可變尺寸)。

 

ProductsCatalog #Pack Size
XactEdit™ Cas9 Nuclease (NLS) kit
Includes 10X XactEdit™ Digestion Buffer, Template for scrambled gRNA, Nuclease-free water
CE1000-50K50 µg
XactEdit™ Cas9 Nuclease (NLS) 1 mg/mLCE1000-5050 µg
XactEdit™ Cas9 Nuclease (NLS) 1 mg/mLCE1000-2505 x 50 µg
XactEdit™ Cas9 Nuclease (NLS) 10 mg/mLCE1001-250250 µg
XactEdit™ Cas9 Nuclease (NLS) 10 mg/mLCE1001-10001000 µg

 

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